细胞生物技术实验指南

《细胞生物技术实验指南》是2009年化学工业出版社出版的图书。

• 书名 细胞生物技术实验指南
• ISBN 9787122034762
• 出版社 化学工业出版社
• 出版时间 2009年1月1日
• 装帧 平装

基本相信

　　作 者:刁勇，许瑞安编

　　版 次:1

　　页 数:416

　　装 帧:平装

　　开 本:16开

　　所属分类:图书 > 科亚测北学与自然 > 生物科学

内容简介

　　《细胞生物技术实验指南》本书着重精选细胞工程和生物势远散怎全衣示负试众子技术领域常用的技术方法和实验方案，不仅介绍常规细胞培葬技术和六问题解决指南，同时提供特殊细胞(如干细胞和神经细胞等)的分离、纯化和培养手段。

　　有目的地引入基用和蛋白芯片检测、RNA十扰、基因治疗病毒载体、细胞核移植、十细往胞及体细胞重新编程等前沿技术。每一种主要的技术方法均从基本原理人手，以主要仪器设备和试剂、操作方法与结果分析、实验技巧及注意事项等为重点逐一阐述，以来自期为从事细胞T程、生物技术、医药卫生、农业、食品360百科等生命科学等领域的研究人员、技术操作人员以及大巾专高校师生·提供一本前瞻性高、重复性好、町操作性兼备的实验技术指南。

作者简介

　　需瑞安，博士。原籍福建晋江，教育部分子药物工程研究中心主任，教授、博士生导师，华侨大学分子药物研究学斗张名精转称雷所所长、国际癌细胞与基因疗法学会常务理事，新西兰食品研究院专业委员、国家863"十五"、"十一五"肺癌临床前基因疗法课题组副组长，北京协和医院荣誉教授、中国支争实析令海洋大学海洋药物客座教授、山东大学教授。《中国临床药理学与治疗学》编委、顾问。从事分子药物学，分子药理学、分子医学、生物技术和细胞工程研究。为口服基因疗法主要奠基人之一。1 983年录取教育部公派出国留学。1989年获得Otago大学博士。先后在新西兰、加拿大、美国、中国香港著名高校及科研机构从事科研与教学来自。其部分研究工作发表于Nature medicine.Cancer ResearchScien360百科ce， Molecular Therapy， Hepatology，PNAS等国际学打短水制星够术刊物。2007年入选美国Marquis科学与工程版Whos Who。

目如录

　　第一章细胞与生物技术基础1

　　第一节细胞生物学1

　　一、细胞生物学研究内容与现状1

　　二、细胞生物学发展史3

必便流河据独迫继谓析调　　三、细胞生物学技术4

　　第二节细胞分子生物学6

　　一、细胞分子生物学的发展6

　　二、细胞分子生物学技术6

　　第三节细胞工程7

　　一、基本概念7

　　二、细胞工程的发展进程7

　　三、细胞工程技术7

　　四、展望9第二章细安纸汽信吸承请毛探弱胞显微观测技术10

　　第一节找转耐办陆的谈每细胞显微技术10

　　一、光学显微镜10

　　二、电子显微镜23

　　三、扫描探针显微镜32

　　第二节细胞超微标记示踪技术38

　　一、电镜细胞化学39

　　二、免疫电镜技术51

　　三、电镜原位杂交技术64第三章细胞检测技术69

　　第一节流式细胞仪检测技术69

　　一、流式细胞仪的工作原理和基本操作69

　　二、流式细胞术样品制备技术71

　　三、细胞免疫荧光染色技术74

　　四、细胞分选技术77

　　第二节细胞化学和免疫细胞化学79

　　一、细胞化学79

　　二、免疫细胞化学85

　　第三节细胞增殖与凋亡100

　　一、细胞增殖100

　　二、细胞凋亡106第四章细胞的培养与分离技术121

　　第一节细底直左村胞培养基本方法和技术121

　　一、细胞的原代培养121

　　二、细胞的传代培养124

　　三、细胞的冻存与球伤著集久下斤溶复苏125

　　四、细胞计数与成活率检测126

　　五、培养物污染的判断及防止127

　　第二节几种特殊细胞的培养与分离130

　　一、神经元细胞的培养与分离130

　　二、肝细厚待鲁女款胞的培养与分离131

　　三、星状细胞的培养与分离133

　　四、上皮细胞待苏使牛齐证调推东德传的培养与分离135

　了术见耐　五、内皮细胞的培养与分离137

　　六、肿瘤细胞情绝额周度副保切染孔的培养与分离138第五章细胞器的分离与制备技术140

　　第一节细胞膜140

　　一、从悬浮细胞中制备细胞膜140

　　二、从组织培养皿中的汇合或部分汇合细胞中分离顶层膜、基开十跑市管等谈鱼钟况写底膜或中间膜142

　　三、从生长于微载体上的细胞中分离细胞膜143

　　第二节桥粒144

　　一、从牛舌或牛口鼻部分离桥粒144

　　二、分级分离桥粒145

　　第三节细胞质145

　　一、网织红细胞和红细胞胞质液的制备145

　　二、用培养细胞制备胞质液146

　屋鸡良胞有附织父　第四节线粒体146

　　一、从肝脏中分离线粒体147

　　二、从组织培养细胞中分离线粒体147

　　第五节高尔基体148

　　一岩明道逐造苦卫且础坚、从大鼠肝脏中分离高尔基绝格丰核景复合体148

　　二、从培养的哺乳动物细胞中分离高尔基体149

　　第六节粗微体150

　演仍加表采非　一、从狗的胰脏中制备粗微体150

　　二、从组织培养细胞中制备粗微体152

　　第七节核糖体154

　　第八节细胞核155

　　一、从肝脏组织中制备细胞核155

　　二、用渗透溶胀法从HeLa细胞悬浮培养物中制备细胞核156

　　三、活化剂裂解方法从悬浮培养的HeLa细胞中制备细胞核157

　　第九节细胞核基质158

　　一、从培养细胞中制备细胞核基质158

　　二、从组织中分离制备细胞核基质159

　　第十节核仁160

　　一、从大鼠肝脏中分离核仁160

　　二、从HeLa细胞中分离核仁161

　　第十一节微管162

　　一、通过组装/解聚从缺少组装驱动成分的缓冲液中分离微管163

　　二、在紫杉醇存在时通过组装的方法分离微管164

　　第十二节中间丝164

　　一、从培养的细胞中分离Ⅰ~Ⅲ型中间丝165

　　二、从组织中分离中间丝(从牛舌上皮分离角蛋白中间丝)166

　　第六章细胞的诱导分化技术167

　　第一节正常细胞的诱导分化167

　　一、小鼠气管上皮细胞的诱导分化167

　　二、视神经节细胞的诱导分化169

　　第二节肿瘤细胞的诱导分化171

　　一、环腺苷酸对脑胶质瘤细胞的诱导分化173

　　二、红景天苷对人肝癌细胞的诱导分化作用174

　　三、5氮杂脱氧胞苷增强苯丁酸钠对急性髓系白血病细胞的诱导分化176

　　第三节干细胞的诱导分化177

　　一、胚胎干细胞的诱导分化178

　　二、神经干细胞的诱导分化179

　　三、髓造血干细胞的诱导分化181

　　四、间充质干细胞的诱导分化183

　　五、视网膜干细胞的诱导分化184

　　六、表皮干细胞的诱导分化186

　　七、肝脏干细胞的诱导分化188

　　八、胰腺干细胞的诱导分化189

　　九、肌肉干细胞的诱导分化192

　　十、小肠黏膜干细胞的诱导分化194

　　十一、肿瘤干细胞的诱导分化196第七章干细胞分离与培养技术198

　　第一节胚胎干细胞198

　　一、小鼠胚胎干细胞的分离培养198

　　二、人胚胎干细胞的分离培养199

　　三、饲养层细胞的分离201

　　四、胚胎干细胞的传代202

　　第二节成体干细胞204

　　一、人体MSC(hMSC)的培养204

　　二、采用hMSC制作人工心脏瓣膜205

　　三、采用hMSC制作人工骨206第八章细胞内基因的导入208

　　第一节物理方法209

　　一、电穿孔转染法209

　　二、细胞显微注射技术210

　　三、基因枪转染法213

　　第二节化学方法214

　　一、磷酸钙沉淀法214

　　二、脂质体介导DNA转染法215

　　三、DEAE葡聚糖转染法216

　　四、阳离子聚合物转染法216

　　第三节生物方法217

　　一、逆转录病毒载体转染法217

　　二、腺病毒载体转染法218

　　三、腺相关病毒载体转染法219第九章哺乳动物细胞RNAi技术221

　　第一节siRNA的设计221

　　第二节siRNA的制备228

　　一、化学合成方法229

　　二、T7RNA聚合酶体外转录合成dsRNA和siRNA230

　　三、用RNaseⅢ消化长片段双链RNA制备siRNA234

　　四、siRNA表达质粒载体和病毒载体240

　　五、siRNA表达框246

　　第三节siRNA导入哺乳动物细胞247

　　一、脂质体248

　　二、多肽MPG转染251

　　三、磁介导转染技术253

　　第四节siRNA文库255

　　一、随机siRNA文库255

　　二、已知基因RNAi文库258第十章细胞内基因的检测262

　　第一节外源基因表达的转录水平检测262

　　一、Northern印迹技术262

　　二、RTPCR技术265

　　三、实时定量PCR技术267

　　第二节外源基因表达的翻译水平检测268

　　一、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法269

　　二、双向聚丙烯酰胺凝胶电泳272

　　三、蛋白质印迹275

　　四、Eastern印迹276

　　五、酶联免疫分析技术277

　　六、免疫沉淀技术279

　　七、蛋白质芯片技术281

　　八、蛋白质生物功能测定法282

　　第十一章染色体检测技术284

　　第一节染色体标本的制备284

　　一、染色体标本的常规制片方法284

　　二、空气干燥法284

　　第二节细胞染色体显带技术286

　　一、染色体C带分带技术286

　　二、染色体G带分带技术287

　　三、染色体Q带分带技术288

　　四、染色体R带分带技术288

　　五、姐妹染色单体分化染色技术289

　　六、染色体银染方法290

　　七、高分辨G带技术291

　　第三节细胞染色体的原位杂交292

　　一、标本的制备技术293

　　二、原位杂交技术294

　　三、与染色体分带技术的结合295第十二章细胞信号通路的检测方法296

　　第一节体内信号转导通路的检测--顺式报告系统296

　　第二节体内信号转导通道的检测--反式报告系统299

　　第三节化学免疫检测方法302

　　第四节磷酸化蛋白激酶免疫沉淀检测303第十三章细胞与重组病毒载体的生产306

　　第一节腺病毒的制备方法306

　　一、腺病毒制备系统的概述306

　　二、细胞内同源重组法制备腺病毒载体306

　　三、细胞外同源重组法制备腺病毒载体308

　　四、腺病毒载体的大规模扩增310

　　五、重组腺病毒的鉴定311

　　第二节腺相关病毒的制备方法313

　　一、293细胞/三质粒生产系统314

　　二、AAV包装细胞系的建立和AAV的生产316

　　三、AAV生产细胞系系统318

　　四、rHSV辅助质粒生产系统321

　　第三节单纯疱疹病毒载体的制备323

　　一、辅助病毒依赖性HSV扩增子载体生产工艺323

　　二、以黏粒为基础生产重组单纯疱疹病毒324

　　三、CreloxP重组系统生产HSV1扩增子载体327

　　四、利用微载体生产重组单纯疱疹病毒载体330

　　五、利用生物反应器规模化生产重组HSV载体332

　　第四节逆转录病毒载体制备方法334

　　一、依赖于包装细胞系的稳定生产方法334

　　二、多质粒共转染的瞬时生产方法337第十四章细胞融合与单克隆抗体338

　　第一节细胞融合338

　　一、细胞融合技术338

　　二、杂交细胞的筛选341

　　第二节单克隆抗体的生产技术345

　　一、动物的选择以及免疫345

　　二、杂交瘤细胞的融合与筛选347

　　三、单克隆抗体的筛选检测350

　　四、杂交瘤细胞的克隆化培养355

　　五、杂交瘤细胞鉴定、冻存与复苏357

　　六、单克隆抗体的大量制备359

　　七、单克隆抗体的纯化360

　　八、单克隆抗体的鉴定361

　　九、单克隆抗体的标记364第十五章治疗性克隆技术369

　　第一节细胞核移植技术370

　　一、罗斯林技术370

　　二、檀香山技术372

　　第二节体细胞重编程技术373

　　一、体细胞与多能干细胞融合技术373

　　二、体细胞与多能干细胞的提取物共孵育技术373

　　三、特定基因的表达诱导技术375第十六章细胞生物技术的应用379

　　第一节医疗检测379

　　一、分子生物学检测技术379

　　二、免疫学检测技术386

　　第二节细胞大规模高效培养技术的工业应用388

　　一、疫苗的生产388

　　二、基因重组蛋白药物的生产390

　　第三节干细胞移植在疾病治疗中的应用392

　　一、BDNF(脑源性神经营养因子)基因修饰的人骨髓间充质干细胞移植治疗

　　帕金森病392

　　二、hIGF1基因修饰骨髓间充质干细胞移植修复兔关节软骨缺损400

　　三、骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死406

　　四、人胰腺干细胞在糖尿病治疗中的应用411

　　参考文献416

前言

　　伴随符细胞生物学、分子生物学、免疫学、遗传学等学科的迅猛发展，以及计算机、网络信息等岛新技术的普遍应用，生命科学研究的进展突飞猛进。作为生命科学主要分支的细胞工程及生物技术·将为解决人类面临的重大问题，如粮食、健康、环境、能源等方而存的问题，提供一个滢有力的工具，因而具有广阔的发展前景，被认为是21世纪科学T程技术重要的核心之一。目前，细胞工程及生物技术最活跃的应用领域是生物医药行业，世界各国均把生物医药行业视为最具潜力的战略产业，纷纷投入巨额资金，进行相戈产船与技术的开发，井匕逐步形成一个巨大的高新技术产业，产生了巨大的社会效益和经济效益。